蛋白質(zhì)保存方法你知多少

　　蛋白質(zhì)的保存是一個(gè)比較棘手的問(wèn)題，分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的童鞋們或多或少都會(huì)碰到。
 

　　有沒(méi)有遇到過(guò)，不同批次純化的蛋白，采用同樣的測(cè)試方法，活性卻不太一樣？
 

　　有沒(méi)有遇到過(guò)新純化的蛋白，從冰箱拿出融化后，居然沉淀了？
 

　　蛋白質(zhì)純化后，保存方式都有哪些呢？
 

　　一、謹(jǐn)記蛋白質(zhì)的保存原則
 

　　低溫、分裝、濃縮、速凍/速融、添加劑
 

　　二、保存方法你知多少
 

　　蛋白質(zhì)的的保存方法的選擇取決于蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性以及保存后什么時(shí)候再次使用你的蛋白。
 

　　1、如即提即用的話，可將濃縮蛋白質(zhì)儲(chǔ)存在單一溶液(如PBS)，置于聚丙烯管或干凈的玻璃容器中，放在4°C冰箱保存。
 

　　優(yōu)點(diǎn)：蛋白容易獲得，可以快速進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，且同一管樣品可重復(fù)取樣，這樣避免了因經(jīng)常解凍而加速蛋白的降解。
 

　　缺點(diǎn)：可能會(huì)面臨微生物污染，蛋白質(zhì)失活和氧化，可能對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的均一性造成影響。要避免這種情況，可以把蛋白質(zhì)分成小份儲(chǔ)存，并加入蛋白酶抑制劑、抗菌劑和還原劑等。但也要根據(jù)自己蛋白的情況，如果你的蛋白是完整的膜蛋白或分泌蛋白,很可能分子內(nèi)存在二硫鍵，為保證其完整性，應(yīng)該存儲(chǔ)在氧化環(huán)境中。另外，儲(chǔ)存時(shí)間超過(guò)一個(gè)月的蛋白可以考慮扔掉。
 

　　2、透析到合適的緩沖液中可以?xún)龈?，?°保存；也可加高濃度的硫酸銨(你的蛋白不沉淀的話)，4°保存。
 

　　注意：你要注意加入硫酸銨后pH會(huì)下降一些，你的緩沖液可不能太接近蛋白的等電點(diǎn)啊，蛋白在等電點(diǎn)附近沉淀很多時(shí)候是不可復(fù)溶，即使復(fù)溶活性也不能保證。
 

　　3、純化后的蛋白測(cè)濃度后，加入50%甘油，確認(rèn)混勻后分裝，液氮速凍，放入-20度或-80度保存，尤其適用于酶類(lèi)。
 

　　優(yōu)點(diǎn)：在低溫下，蛋白質(zhì)對(duì)微生物污染，蛋白酶降解和氧化反應(yīng)更有抵抗力，容易保證其活性。用甘油或乙二醇稀釋使蛋白處于溶液中，可以方便取樣。此外，這種方式儲(chǔ)存的蛋白質(zhì)可以保存長(zhǎng)達(dá)一年，對(duì)于抗體軛合物是一個(gè)好的選擇。
 

　　缺點(diǎn)： 蛋白質(zhì)在-20°溶液中仍有可能遭受水解、污染和氧化，如果蛋白對(duì)還原性環(huán)境要求比較高，也需加入抑制劑、還原劑等。而且將樣品存放在50%冷凍保護(hù)劑中有時(shí)是不可取的，取決于你接下來(lái)要做的實(shí)驗(yàn)。
 

　　4、有些蛋白可以不加甘油，直接液氮速凍幾分鐘，-80度保存。
 

　　優(yōu)點(diǎn)：可以長(zhǎng)期保存(多年)，不需要甘油、*等化學(xué)物質(zhì)，避免蛋白質(zhì)降解或微生物污染。
 

　　缺點(diǎn)：冷凍蛋白質(zhì)應(yīng)一次性使用，為了避免反復(fù)凍融發(fā)生降解。此外,抗體軛合物(特別是堿性磷酸酶復(fù)合物)冷凍后可能會(huì)失活。
 

　　5、長(zhǎng)期保存蛋白質(zhì)的另一個(gè)方式是凍干(lyophilization)。
 

　　優(yōu)點(diǎn)：蛋白質(zhì)凍干后會(huì)呈現(xiàn)蓬松的白色粉末形式，處于脫水的狀態(tài)，可以在冰箱中無(wú)限期保存。
 

　　缺點(diǎn)：對(duì)于某些蛋白質(zhì)，凍干操作有一個(gè)潛在問(wèn)題就是蛋白質(zhì)不能復(fù)溶。凍干/復(fù)溶的過(guò)程同樣會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生一定的傷害作用。
 

　　三、這些重點(diǎn)你要知道
 

　　1、保證恒定的pH值，一般PBS最為常用；
 

　　2、保證一定的蛋白濃度，如果濃度比較稀的話，可以考慮添加一定量的BSA；
 

　　3、甘油的添加也能在很大程度上提高抗體的穩(wěn)定性；
 

　　4. 為了防腐可以添加一定量的*(辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的二抗一般不能加)，如果樣品要用于生物學(xué)檢測(cè)，避免使用防腐劑。
 

　　5、無(wú)論是冷凍還是儲(chǔ)存在溶液中，將蛋白進(jìn)行分裝，以避免凍融，降低污染的風(fēng)險(xiǎn)。
 

　　6、進(jìn)行蛋白質(zhì)操作實(shí)驗(yàn)時(shí)一定要帶手套，們的皮膚上有一些蛋白酶，這些蛋白酶很可能會(huì)降解掉我們的蛋白樣品。皮膚上的其他化學(xué)分子也可能會(huì)污染蛋白樣品。另外，為了防止細(xì)菌的生長(zhǎng)，蛋白質(zhì)最好保存在滅菌的小管中。
 

　　7、避免反復(fù)凍融或凍干重溶解過(guò)程，這樣很可能會(huì)降低生物活性。
 

　　8、避免震蕩，震蕩產(chǎn)生的剪切力有可能會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生破壞作用。震蕩時(shí)溶液中會(huì)產(chǎn)生氣泡，氧氣的進(jìn)入會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)處在氧化環(huán)境中。蛋白質(zhì)中含有半胱氨酸，其極易被氧化為胱氨酸，這一過(guò)程很可能會(huì)破環(huán)蛋白質(zhì)的活性。